INMUNOBIOLOGIA - Práctica N° 06

PRACTICA N° 06

FIJACION DE COMPLEMENTO

INTRODUCCION
La definición de complemento, de la OMS es la siguiente: “El sistema de complemento está formado por factores presentes en el suero normal que se activan característicamente por complejos antígenos anticuerpos. Como consecuencia de esta actividad ocurren varias reacciones biológicas.

El complemento está presente en el suero fresco de mamíferos. Se utiliza generalmente por conveniencia, suero fresco de cobayo como fuente de complemento. Dado que algunos componentes del complemento son muy sensibles a la temperatura, por lo que el suero de cobayo debe mantenerse en refrigeración. La temperatura óptima para la activación del complemento es de 37°C. Sueros calentados a 56°C por 30 minutos pierde su actividad cuando se añade complemento a un sistema antígeno (GRC) más anticuerpo (hemolisina) e activa al complemento y como consecuencia de esta activación se produce lisis de los glóbulos rojos..

OBJETIVOS
a. Demostrar la fijación de complemento por la vía clásica y evidenciar la lisis de los GRC.
b. Aplicación de la fijación de complemento para fines de diagnóstico.

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES
- GRC al 2% en SSF.
- Complemento
- Hemolisina
- SSF
- Agua destilada
- Tubos de ensayo y gradilla
- Pipetas de 1 ml.

METODOS.
1. Añadir los reactivos, según el siguiente protocolo:

	1	2	3	4	5
GRC al 2% (mL)	0,2	0,2	0,2	0,3	0,3
Complemento (mL)	0,2	-.-	0,2	-.-	-.-
Hemolisina (mL)	0,2	0,2	-.-	-.-	-.-
SSF (mL)	-.-	0,2	0,2	0,3	-.-
H₂0 (mL)	-.-	-.-	-.-	-.-	0,3

2. Incubar a 37°C en baño maría por 30 minutos.
3. Leer

RESULTADOS

Prueba positiva = hemólisis
Prueba negativa = no hemólisis

Después de la práctica considere:

1. Discuta los resultados que ocurren en cada tubo.
2. Diseñe un método de laboratorio para diagnosticar anticuerpo contra
Salmonella